Ang polymerase chain reaction (PCR) ay isang modernong tool para sa pag-diagnose ng iba't ibang mga impeksyon, na nailalarawan sa pamamagitan ng mataas na katumpakan. Pinapayagan ng pagsusuri ng PCR na makilala ang mga pathogen Nakakahawang sakit, umaasa sa kanilang genetic material (RNA o DNA). Ang biological na materyal para sa pananaliksik ay maaaring dugo, pahid ng ari, laway, atbp.

KONSULTASYON SA MGA RESULTA NG PAGSUSURI o ultrasound - 500 rubles.

Ang paraan ng PCR ay natuklasan noong 1983. Ang lumikha nito, si Kary Mullis (USA), ay nakatanggap ng isang Nobel Prize sa larangan ng kimika. Sa loob ng unang sampung taon, ang pamamaraan ay naging isang ipinag-uutos na pagsubok sa laboratoryo sa buong mundo, na nakakuha ng pagkilala mula sa mga siyentipiko at mga doktor.

Nag-aalok ang Diana Medical Center na magsagawa ng pananaliksik gamit ang polymerase chain reaction technique sa pinakamaikling panahon at may pinakamataas na antas ng katumpakan. Ang aming diagnostic base ay nakakatugon sa lahat internasyonal na pamantayan at mga kinakailangan.

Anong mga impeksyon ang maaaring masuri gamit ang PCR?

Ang mga ito ay ipinadala para sa mga diagnostic, o. APagsusuri ng PCRginagawang posible upang masuri ang isang malaking bilang ng iba't ibang mga impeksiyon. Kasama rin sa grupong ito ang mga nakatagong sakit na asymptomatic na nasa tagal ng incubation:

Sa pamamagitan ng paggamit Paraan ng PCRay matatagpuan:

• hepatitis C, B;
• ureaplasmosis ng mga genital organ;
• - ureaplasmosis, trichomoniasis, gardnerellosis;
• chlamydia ng maselang bahagi ng katawan at respiratory tract;
• bacterial vaginosis;
• Nakakahawang mononucleosis;
• tuberkulosis;
• salmonellosis;
• tuberculosis (pulmonary at extrapulmonary forms);
• listeriosis, tick-borne encephalitis, Lyme disease;
• , papillomavirus, ;
• mga nakakahawang sakit sa pagkabata na nakita sa panahon ng pagbubuntis at bago ang paglilihi - beke, dipterya, tigdas;
• HIV.

Para sa bawat isa sa mga sakit sa itaas na nakita ng ibang paraan, ipinapayong magsagawa ng PCR test. Ang mga causative agent ng maraming impeksyon ay may ilang uri (strains), at ang mas tumpak na diagnosis ay ginagawang mas epektibo ang paggamot. Dahil ang iba't ibang uri ang mga pathogen ay may sariling mga paraan ng paghahatid ng impeksiyon; Halimbawa, ang hepatitis A ay maaaring makuha sa pamamagitan ng mga nakabahaging bagay at kagamitan (sakit ng maruruming kamay), at ang hepatitis C ay maaari lamang maipasa sa pamamagitan ng dugo, mga medikal na instrumento at pakikipagtalik. Mahalaga ito para sa mga malapit sa pasyente.

Ang kakanyahan ng paraan ng reaksyon ng polymerase chain

Ang pamamaraan ay batay sa pagkilala sa pathogen sa pamamagitan ng mga seksyon ng DNA o RNA. Ang PCR ay nagpapaalala sa forensic science, kapag ang isang kriminal ay natagpuan sa pamamagitan ng mga piraso ng balat o buhok na naiwan sa pinangyarihan ng krimen. Dahil ang bawat buhay na organismo ay may kakaibang istruktura ng DNA o RNA. Ginagawang posible ng pamamaraan na tumpak na makilala ang isang mikroorganismo, kahit na ito ay naroroon sa materyal na pinag-aaralan sa kaunting dami.

Angkop ang PRC para sa pagtukoy ng latent carriage, hindi tipikal, nabura at iba pang anyo ng mga nakakahawang sakit. Ang mga diagnostic ay lubos na tumpak at samakatuwid ay halos hindi gumagawa ng mga error o maling resulta. Ang pagsusuri ay kadalasang inireseta bilang karagdagang pagsusuri upang matukoy ang isang partikular na uri ng virus o mikrobyo.

Mga kalamangan at kawalan ng paraan ng PCR

Ang pagsusuri sa PCR ay isang epektibong tool sa diagnostic na nagpapahintulot sa doktor na hindi lamang matukoy nang tama ang uri ng nakakahawang pathogen sa katawan ng pasyente, kundi pati na rin ang bilang ng mga mikrobyo. Ang tampok na ito ay nagbibigay-daan sa paraan ng PCR na epektibong makakita ng mga malalang impeksiyon, halimbawa, viral hepatitis.

Ang mga bentahe ng pamamaraan ay kinabibilangan ng mga sumusunod na tampok:

• Kagalingan sa maraming bagay . Ginagawang posible ng pamamaraan na makilala ang lahat ng kasalukuyang kilalang microorganism, anuman ang uri ng materyal na pinag-aaralan.
• Pagtitiyak . Pinapayagan ka ng PCR na matukoy ang DNA ng isang virus o bakterya na may 100% katumpakan, na hindi posible sa anumang iba pang paraan ng diagnostic.
• Pagkamapagdamdam – kahit isang maliit na "piraso" ng DNA o RNA ay maaaring makita at makilala dahil sa mabilis na reaksyon ng pagbuo ng kopya.
• Kahusayan – ang isang diagnosis ay maaaring gawin batay sa polymerase chain reaction sa loob ng ilang oras pagkatapos ng koleksyon ng biological na materyal, na ginagawang posible upang simulan ang paggamot ng sakit sa isang napapanahong paraan.
• Posibilidad ng quantitative analysis . Ang tampok na ito ay mahalaga sa pagtukoy ng mga sakit na dulot ng oportunistang flora (halimbawa, thrush). Ang pagtaas ng nilalaman ng candida fungi sa katawan ay nagdudulot ng sakit, at ang normal na halaga ay hanggang 10 3 - 104 CFU/tamp. - Hindi.

Ang mga disadvantage ng PCR diagnostics ay ang pangangailangan para sa high-tech na kagamitan at mataas na kwalipikadong mga espesyalista. Para sa pagsusuri, kailangan mo ng isang espesyal na kahon ng laminar, kung saan ang kinakailangang temperatura ay pinananatili at ang kadalisayan ng eksperimento ay natiyak.

Paano kumuha ng PCR test nang tama: paghahanda

Upang maunawaan nang eksakto kung paano maghanda para sa paparating na pagsusuri sa PCR, ang pasyente ay dapat tiyak na suriin sa kanyang doktor kung anong uri ng biological na materyal ang binalak na kunin. Ang paghahanda ay direktang nakasalalay dito.

• Ang paglabas mula sa mga maselang bahagi ng katawan, isang pahid mula sa cervix o urethra, ihi - sa pamamagitan ng pagsusuri sa mga uri ng materyal na ito gamit ang paraan ng PCR, ang mga impeksyon sa mga genital organ ay epektibong nasuri.
• Viral hepatitis C, impeksyon sa HIV nangangailangan ng sampling ng dugo para sa pagsusuri ng PCR.
• Gamit ang isang pamunas sa lalamunan, maaari mong kumpirmahin o pabulaanan ang pagkakaroon ng nakakahawang mononucleosis.

Pahid sa mga babae

Upang masuri ang mga impeksiyon na nakukuha sa pakikipagtalik gamit ang PCR sa mga kababaihan, bilang panuntunan, kinukuha nila vaginal smear. Sa panahon ng pagbubuntis, nalalapat ang mga karaniwang tuntunin para sa paghahanda para sa pagsusuri ng PCR.

• Ilang araw bago ang PCR test, kailangan mong ihinto ang douching at intimate hygiene na produkto.
• Isang linggo bago ang pagsubok para sa impeksyon, dapat mong ihinto ang paggamit ng anumang uri ng mga gamot, siyempre, kung hindi sila kasama sa programa ng paghahanda para sa pagsusuri ng PCR na inireseta ng doktor.
• Ilang araw bago ang pagsusuri, kailangan mong simulan ang pag-iwas sa pakikipagtalik.
• Hindi na kailangang maghugas sa araw ng PCR test ay isinasagawa ang kalinisan ng ari sa gabi bago, gamit lamang ang maligamgam na tubig.
• Hindi ka dapat umihi ng ilang oras bago ang pagsusulit.

Pahid sa mga lalaki

Hindi mahirap maghanda para sa pagkolekta ng smear mula sa urethra para sa PCR. Sapat na sundin ang mga alituntuning nakabalangkas sa ibaba.

• 2 araw bago ang pagsusuri sa PCR, kailangan mong simulan ang pag-iwas sa pakikipagtalik.
• Ang mga gamot ay dapat ihinto humigit-kumulang 7 araw bago ang pagsusuri, maliban kung, siyempre, sila ay partikular na inireseta ng isang doktor.
• Ang kalinisan ng genital ay dapat isagawa sa gabi bago ito dapat gawin sa araw ng pagsusuri sa PCR.
• Inirerekomenda na huwag umihi ng humigit-kumulang 2-3 oras bago kumuha ng pagsusulit.

Pagsusuri ng dugo

Kung sa panahon ng pagsusuri ng PCR ang dugo ng pasyente ay naging object ng pag-aaral, ang mga patakaran para sa paghahanda para dito ay ang mga sumusunod.

• Ang pinakamainam na oras para mag-abuloy ng dugo ay sa umaga; Maaari kang malayang uminom ng tubig.
• Tumigil sa alak isang araw bago ang pagsusuri sa PCR, huminto sa paninigarilyo isang oras bago ito.
• Kung pinahihintulutan ng iyong kalusugan ang opsyong ito, inirerekumenda na huminto sa pag-inom ng mga gamot nang ilang sandali.
• Bago mag-donate ng mga sample ng dugo, dapat kang magpahinga nang humigit-kumulang 20 minuto.
• Sa bisperas ng pagsusuri sa PCR, ang emosyonal at pisikal na labis na karga ay ganap na hindi kasama; maaari silang makaapekto sa mga resulta ng pagsusuri.

Paano isinasagawa ang pagsusuri sa PCR?

Para sa pananaliksik, ang anumang kapaligiran kung saan maaaring matatagpuan ang pathogen ay kinuha, ngunit ang mga sumusunod ay kadalasang ginagamit:

• Serum ng dugo o plasma – upang matukoy ang maraming pathogens – hepatitis B, C, D, G virus, herpes, HIV, cytomegalovirus;
• Katas ng ihi at prostate – kapag nag-diagnose ng mga STD;
• plema, pleural fluid, bronchoalveolar lavage – para sa diagnosis ng pulmonary at extrapulmonary forms ng tuberculosis;
• Cerebrospinal fluid – para sa pag-diagnose ng mga impeksyon sistema ng nerbiyos;
• Amniotic fluid - upang matukoy ang mga impeksyon sa intrauterine;
• Pamahid sa lalamunan - upang matukoy ang mga pathogen ng nakakahawang mononucleosis at diphtheria;
  scrapings at smears mula sa mauhog lamad upang masuri ang mga STD;
  mga selula ng gastric mucosa at gastric juice- upang matukoy ang Helicobacter bacteria na nagdudulot ng gastritis at ulcers.

Sa isang sample ng materyal, maraming mga pathogen na nakapasok sa katawan ay maaaring makita nang sabay-sabay. Ang kakayahang umangkop na ito ay nagliligtas sa pasyente mula sa mga karagdagang pagsusuri at hindi kinakailangang gastos.

Posibleng matukoy at matukoy ang mga lugar ng genetic na impormasyon gamit ang mga espesyal na reference na DNA marker (primer) na nilikha para sa bawat kilalang pathogen. Ang pamantayan ay nagpapahintulot sa iyo na mahanap ang "iyong" fragment sa milyun-milyong iba pa. Kung mangyari ito, magsisimula ang polymerase chain reaction.

Ang reaksyon ng PCR ay gumagawa ng isang malaking bilang ng mga kopya ng natukoy na seksyon ng genetic na impormasyon (pagtitiklop). Mahalaga na ang mga seksyon lamang ng DNA at RNA na kinakailangan para sa pagsusuri ay ginagaya. Samakatuwid, ang kadalisayan ng eksperimento at ang kakayahan ng kawani na pangasiwaan ang mga kagamitan at mga sample ay napakahalaga.

Ang chain reaction ay nagpapatuloy nang napakabilis pagkatapos lamang ng dalawang oras, ang seksyon ng DNA ay tumataas ng milyun-milyong beses, na ginagawang posible upang matukoy at tumpak na makilala ang impeksiyon. Upang gumana sa mga pamantayan, ang mga test tube ay inilalagay sa isang espesyal na aparato. Gamit ang programa, tinukoy ang isang algorithm na nagbabago ng temperatura ng medium nang maraming beses at nakakaapekto sa kurso ng reaksyon. Ang resulta ng PCR ay makikita kaagad pagkatapos ng pagtatapos ng pag-aaral.

Paano i-decipher ang pagsusuri ng PCR

Ang pagsasagawa ng pag-aaral ng PCR ay ginagawang posible hindi lamang upang matukoy ang uri ng impeksiyon na naroroon sa katawan ng pasyente, kundi pati na rin upang suriin ito mula sa isang quantitative point of view (ang bilang ng mga microbes). Pagde-decode ng mga resulta ng quantitative PCR analysis plays mahalagang papel sa pagtuklas at pagsubok sa pagiging epektibo ng mga paggamot para sa malaking bilang ng mga malalang sakit, tulad ng hepatitis C.

Ang resulta ng pagsusuri sa PCR ay maaaring positibo o negatibong mga sagot.

• Negatibong resulta . Ang mga bakas ng impeksyon ay hindi nakita sa biological na materyal na pinag-aaralan sa panahon ng pagsusuri ng PCR. Bilang isang patakaran, batay sa isang negatibong resulta, maaari nating ipagpalagay na talagang walang impeksyon sa katawan.
• Positibong resulta. Ang resulta ng pagsusuri ng PCR ay nagpapahiwatig na ang mga bakas ng nakakahawang sakit ay naroroon sa biological na materyal ng pasyente. Ang isang positibong resulta ng pagsusuri sa PCR ay nailalarawan sa pamamagitan ng mataas na antas ng katumpakan.

Minsan ang impeksyon ay napansin laban sa background ng kumpletong kalusugan at walang mga palatandaan ng sakit. Ang ilang mga pasyente ay naniniwala na ang pagsusuri ay ginawa nang hindi tama, ngunit ang tunay na sitwasyon ay naiiba. Kung ang PCR ay nagpapakita na ang pathogen ay nasa katawan, kung gayon ito ay talagang naroroon. Ang mga nakakahawang sakit ay hindi kailanman magsisimula kaagad pagkatapos ng impeksiyon, na may panahon ng pagpapapisa ng itlog na may iba't ibang haba.

Ang nakatagong panahon ay maaaring tumagal ng napakahabang panahon, halimbawa, na may AIDS - ilang taon, hanggang sa ang ilang mga mekanismo ay itulak ang mga virus na magparami. Ang pathogen ay nakita sa katawan ng mga carrier at sa mga hindi nakakumpleto ng paggamot. Kadalasan ang iba't ibang mga STD ay nagiging isang nakatagong (latent) na anyo. Sa kasong ito, maaaring kailanganin ang mga karagdagang diagnostic sa laboratoryo.

Katumpakan ng interpretasyon ng mga resulta ng pagsusuri sa PCR

Ang paraan ng PCR, na ginagawang posible na makita ang isang medyo malaking bilang ng mga impeksyon, ay nailalarawan sa pamamagitan ng pagtaas ng katumpakan, pagiging sensitibo at pagtitiyak. Ang mga katangiang ito ay nagpapahiwatig na ang pagsusuri sa PCR ay maaaring:

• Tukuyin nang tumpak hangga't maaari ang kawalan o pagkakaroon ng isang nakakahawang pathogen.
• Tukuyin nang tumpak hangga't maaari ang tiyak na uri ng nakakahawang pathogen (katiyakan).
• Kilalanin ang impeksyon kahit na ito ay nakatago. Pinag-uusapan natin ang mababang antas ng pagkakaroon ng microbial DNA sa biological na materyal ng pasyente na sinusuri (sensitivity).

Ang mga bentahe ng paraan ng PCR kaysa sa enzyme immunoassay at iba pang mga immunological na tool para sa pag-detect ng impeksyon ay mas maliit ang posibilidad na magbigay ng mga maling resulta. Iyon ay, ang pag-decipher ng pagsusuri ng PCR ay mas malamang na magpakita ng kawalan ng mga nakakahawang mikrobyo kung sila ay naroroon sa katawan ng pasyente.

Bilang karagdagan, halos hindi nangyayari na ang pag-decipher ng pagsusuri ay nagpapakita ng pagkakaroon ng isang hindi umiiral na impeksiyon sa katawan, iyon ay, ay nagbibigay ng maling positibong resulta, siyempre, isang daang porsyento tamang resulta Imposible pa ring tumawag ng PCR, kaya kailangang dagdagan ang pag-aaral na ito ng iba pang mga pamamaraan.

Nilalaman

Ang mga interesado sa mga bagong pamamaraan ng diagnostic ay dapat malaman kung ano ang paraan ng PCR. Mga modernong teknikal na kakayahan sa larangan pananaliksik sa laboratoryo magbigay ng pagkakataong makilala ang maraming sakit sa mga unang yugto. Ang polymerase chain reaction (PCR) ay itinuturing na sa sandaling ito ang pinakatumpak at bagong paraan.

Pagsusuri ng PCR

Pagsusuri ng PCR - ano ito? Ginagamit ng pamamaraang ito ang mga prinsipyo ng molecular biology. Upang pag-aralan ang materyal, ginagamit ang mga espesyal na enzyme na paulit-ulit at mabilis na kinokopya ang mga fragment ng DNA at RNA ng mga pathogen. Umiiral iba't ibang uri Pagsusuri ng PCR depende sa materyal na sinusuri (dugo, ihi, dumi, atbp.). Pagkatapos ng pagproseso, inihambing ng mga kawani ng laboratoryo ang resulta na nakuha sa database, kilalanin ang konsentrasyon at uri ng pathogen.

Ang pagsusuri ng PCR ay inilalagay sa isang espesyal na cycler (aparato), na nagpapainit at nagpapalamig sa mga tubo na may biomaterial. Ang mga pagbabago sa temperatura ay kinakailangan para sa pagtitiklop ng fragment. Ang katumpakan ng resulta ay depende sa katumpakan rehimen ng temperatura. Ang paraan ng polymerase chain reaction ay nakakatulong upang makilala:

• Nakakahawang mononucleosis;
• impeksyon sa cytomegalovirus;
• viral hepatitis G, C, B, A;
• mga impeksiyon/sakit na nakukuha sa pakikipagtalik (STIs/STDs): gardnerellosis, trichomoniasis, ureaplasmosis;
• impeksyon sa herpetic;
• mga oncogenic na virus;
• listeriosis;
• impeksyon sa Helicobacter pylori;
• tick-borne encephalitis, borreliosis;
• tuberkulosis;
• candidiasis.

Dugo

Sa ngayon, dahil sa pagiging bago ng teknolohiya, mataas pa rin ang presyo ng pagsusuri sa dugo ng PCR. Upang ihanda ang biomaterial, hindi mo kailangang matugunan ang ilang mga kinakailangan. Kahit na sanhi pisikal na Aktibidad, stress, pagbabago sa diyeta, pagbabago sa komposisyon ay hindi nakakaapekto sa mga resulta ng pag-aaral. Ang pagsusuri sa dugo ng PCR ay maaari lamang masira sa pamamagitan ng pagkuha ng mga antibacterial agent, kaya bago ito kunin, dapat kang huminto sa pagitan ng paggamot at pagsusuri.

Ang pagsusuri sa dugo ng PCR ay ang pinakakaraniwang opsyon para sa pag-diagnose ng talamak, talamak na mga nakakahawang pathologies na may mga viral o hindi tipikal na pagpapakita. Ang mga pamamaraan ng serological na pananaliksik ay may ilang mga paghihirap sa kanilang pagpapatupad - ang pagkakaroon ng isang pathogen ay tinutukoy ng pagkakaroon ng mga antibodies sa katawan ng tao. Ang resulta ay maaaring maling negatibo kung ang kondisyon ng pasyente ay hindi nagbibigay ng oras para sa kanilang pag-unlad.

pahid

Sa larangan ng ginekolohiya, ginagamit ang pagsusuri ng PCR smear upang pag-aralan ang pagkakaroon ng mga nakakahawang mikroorganismo. Ang trabaho sa materyal ay isinasagawa ayon sa parehong prinsipyo tulad ng sa dugo: maraming pagpapalaki ng mga fragment ng DNA ng pathogen upang madaling makilala ito. Nakakatulong din ito upang matukoy ang mga nakatagong impeksyon sa isang babae. Maaaring kunin ang iba't ibang biological fluid para sa pagsusuri: laway, plema, ihi, dugo. Sa ginekolohiya, para sa tumpak na pagpapasiya, isang pahid mula sa vaginal mucosa mula sa cervical canal.

Mayroong ilang mga indikasyon para sa pagsasagawa ng PCR. Kadalasan kailangan itong gawin upang makilala ang isang pathogen na lumalaban sa mga antibiotics. Sa mga kababaihan, ang mga pangunahing indikasyon para sa pagsusuri gamit ang pamamaraang ito ay:

• pagbubuntis na mahirap;
• talamak na yugto ng mga STI;
• kung may hinala na ang STI ay umunlad sa talamak na yugto;
• naghahanap ng mga sanhi ng kawalan ng katabaan.

Kala

Upang makakita ng impeksyon, maaaring magreseta ang doktor ng PCR stool test. Upang makuha ang pinaka-maaasahang resulta pagkatapos ng pagsubok, dapat mong sundin ang mga sumusunod na patakaran bago mangolekta ng biomaterial:

• itigil ang pag-inom ng mga laxative ilang araw bago ang: mga langis, suppositories;
• ibukod ang mga gamot na nagbibigay ng partikular na kulay sa dumi, halimbawa, naglalaman ng bakal.

Para sa koleksyon, dapat kang gumamit ng sterile stick at lalagyan. Hindi na kailangang punasan ang mga ito ng anumang bagay o banlawan ang mga ito. Kapag nangongolekta ng materyal, mag-ingat na huwag hawakan ang mga panloob na dingding ng lalagyan gamit ang iyong kamay. Siguraduhing walang dumi ng ihi sa dumi ng tao; Kailangan mong kolektahin ang materyal sa araw ng paghahatid; Ang pamamaraang ito ng diagnostic ay may mga sumusunod na pakinabang:

Ihi

Kung kinakailangan, ang iyong doktor ay maaaring kumuha ng ihi para sa pagsusuri. Ang mataas na katumpakan ay nagbubukas ng posibilidad na magtrabaho sa anumang biological fluid kung saan maaaring makuha ang viral DNA. Upang kumuha ng pagsusuri sa ihi ng PCR, dapat mong sundin ang mga sumusunod na paghihigpit bago kolektahin ang materyal:

• itigil ang pakikipagtalik nang hindi bababa sa 1 araw bago ang pamamaraan;
• anumang trabaho ay dapat makumpleto 3 linggo bago ang paghahatid antibacterial na paggamot, dahil ang mga gamot ay magpapalabo ng larawan;
• Kailangan mong kunin ang pagsusulit sa walang laman na tiyan (ipinagbabawal din ang mga likido);
• Kailangan mong kunin ang unang bahagi ng materyal sa umaga.

Mga resulta ng pagsusuri sa PCR

Mula sa itaas ay malinaw kung ano ang pagsusuri ng PCR at ang malinaw na mga pakinabang ng pamamaraang ito ng pananaliksik ay nakikita. Ang isa pang bentahe ng diagnostic procedure na ito ay ang kadalian ng pag-decipher ng mga resulta. Isinasaalang-alang kung gaano katagal ang isang pagsusuri sa PCR (ang proseso mismo ay tumatagal ng mga 5 oras, ngunit ang laboratoryo ay gumagawa ng data sa loob ng 1-2 araw), ang pamamaraang ito ng diagnostic ay nagiging ang pinakamahusay na pagpipilian upang matukoy ang iba't ibang mga impeksiyon. Batay sa mga resulta, maaaring sabihin sa iyo ng iyong doktor na ang pagsusuri ay:

1. Negatibo - ang materyal sa pagsubok ay hindi naglalaman ng nais na pathogen.
2. Positibo - RNA at DNA ng pathogen ay natagpuan.

Minsan ang dami ng pagpapasiya ng mga microorganism ay isinasagawa. Ito ay kinakailangan para sa mga sakit na sanhi ng mga oportunistang pathogen. Ang kakaiba ng mga virus na ito ay lumilitaw lamang ang mga ito sa labis na dami at napakahirap na hanapin ang mga ito sa pamamagitan ng tradisyonal na pananaliksik. Ang kadahilanan na ito ay mahalaga para sa pagpili ng mga taktika sa paggamot upang epektibong gamutin ang mga impeksyon sa viral, halimbawa, hepatitis, HIV.

Para sa 12 impeksyon

Upang lubos na maunawaan kung ano ito Mga diagnostic ng PCR impeksyon at kung gaano ito kabisa, kailangan mong malaman na maaari itong maghiwalay ng hanggang 12 pathogens. Ang teksto ay isinasagawa lamang sa mga kondisyon ng laboratoryo. Para sa pananaliksik, ginagamit ang mga espesyal na enzyme na nagpapataas ng dami ng RNA at DNA fragment ng virus nang maraming beses. Maaaring makita ng pagsusuri ng PCR para sa 12 impeksyon:

• Mycobacterium tuberculosis;
• cytomegalovirus;
• hepatitis C, G, B, A;
• herpes 1, 2 uri;
• Epstein-Barr virus (nakakahawang mononucleosis);
• mga impeksiyon na naililipat sa pakikipagtalik, halimbawa, chlamydia;
• listeriosis;
• impeksyon sa candida;
• Helicobacter pylori;
• borreliosis, tick-borne encephalitis.

Para sa hepatitis C

Ang pamamaraang ito ng diagnostic ay nakakatulong na matukoy ang pagkakaroon ng virus sa dugo. Nagbibigay ito ng pagkakataon sa mga doktor na pag-usapan ang presensya o kawalan nito. Mayroong dalawang uri ng pagsusuri sa PCR para sa hepatitis C: qualitative at quantitative. Ang unang opsyon ay nagpapahiwatig lamang ng presensya nito at maaaring may mga salitang "natukoy"/"hindi natukoy". Ang ganitong uri ng pagsubok ay may sensitivity ng 10-500 IU/ml. Ito ay nagpapahiwatig na kung ang nilalaman ng pathogen sa katawan ay mababa, ang pagsusuri ay "hindi matukoy."

Ang quantitative analysis ay mas tumpak at magpapakita ng konsentrasyon ng impeksyon sa dugo. Ang indicator na ito ay tinutukoy bilang "viral load" at sinusukat sa dami ng viral RNA sa bawat partikular na dami ng dugo. Ang pag-decode sa iba't ibang mga laboratoryo ay maaaring mag-iba. Bilang karagdagan sa pagsukat ng IU/ml, ginagamit ang mga unit na "kopya". Maaari kang magbilang ng mga kopya bawat IU gamit ang formula: 1 IU = 4 na kopya. Kung ang halaga ng pag-decode para sa pagkakaroon ng virus ay lumampas sa 800,000 IU/ml (o 800*103), ito ay nagpapahiwatig ng mataas na nilalaman ng pathogen.

Para sa tuberculosis

Ang pagsusulit ay dapat gawin sa umaga. Ito ay mahalaga upang maiwasan ang buong masa ng plema na nabuo sa magdamag mula sa paglabas ng tiyan. Ang pagsusuri ng PCR para sa tuberculosis ay kasinghalaga ng ELISA, Mantoux, at tomography. Ang pagsubok ay tumutulong upang matukoy ang pagkakaroon ng mycobacteria, ang estado ng ihi, kabuuang immunoglobulin, ESR, at matukoy ang kalagayan ng mga baga sa sandaling ito. Upang matiyak ang tumpak na mga resulta kapag sinusuri ang PCR, dapat itong isagawa bilang pagsunod sa mga sumusunod na patakaran:

1. Ang paghahasik ay isinasagawa ng 3 beses, ngunit ang kumpletong aspirasyon ng mga nilalaman ng tiyan ay dapat isagawa lamang sa isang setting ng ospital.
2. Ang Mycobacteria ay napansin ng kultura ng mga umiiral na masa sa tiyan sa mas mababa sa 50% ng mga diagnosis. Kahit sa pagtanggap pinakamainam na kondisyon Inirerekomenda ang ultratunog sa halip.
3. Kahit na ang resulta ay negatibo, ang posibilidad na magkaroon ng tuberculosis na may mga pagbabago sa ESR, immunoglobulin o iba pang mga tagapagpahiwatig ay hindi maaaring ganap na ibukod.
4. Ang kultura ng mga materyales sa panahon ng PCR ay hindi gaanong madaling kapitan sa mga kondisyon ng pathological kung ito ay nakuha bilang bahagi ng isang bronchoscopic na pagsusuri, na hindi kasama ang hinala ng TB sa isang bata.

Para sa HIV

Para sa maraming tao, ang diagnosis na ito ay itinuturing na isang sentensiya ng kamatayan. Para sa kadahilanang ito, pagkatapos ng madalas na pakikipagtalik, ang isang tao ay nagiging mas matulungin sa mga senyas na ibinibigay ng kanyang katawan (at kung minsan ay iniimbento ang mga ito). Ang pinaka-maaasahang opsyon para makakuha ng kumpirmasyon o pagtanggi ng sakit na ito– Pagsusuri ng PCR para sa HIV. Maaaring gamitin ang pagsusulit upang matukoy ang mga sumusunod posibleng mga problema may kalusugan:

1. Pagtanggi/pagkumpirma ng pagkakaroon ng HIV sa panahon ng seronegative.
2. Pagpapasiya ng genotype ng HIV-1, HIV-2.
3. Paglilinaw ng paglalarawan ng proseso ng pathological sa kaso ng mga kaduda-dudang resulta ng immunoblot.
4. Impeksyon pagkatapos ng pagsasalin ng dugo.
5. Pagpapasiya ng katayuan sa HIV sa mga batang ipinanganak ng mga ina na nagdadala ng sakit.
6. Tumutulong sa pagtatatag ng pagsubaybay sa viral load ng katawan.

Para sa HPV

Ang papilloma virus ay maaaring makita sa sinumang tao, sa mahabang panahon ito ay maaaring nasa isang nakatagong estado. Ang pag-unlad ay pinupukaw ng mahinang kaligtasan sa sakit, stress o emosyonal na pagsabog. Ang PCR test para sa HPV ay nakakatulong na matukoy ang konsentrasyon ng virus sa dugo. Para sa kadahilanang ito, inirerekomenda na ang mga pagpapasiya ay gawin sa dami sa halip na husay. Makakatulong ang mga datos na ito na mahulaan ang posibilidad ng isang malignant na impeksiyon.

Ang pamamaraan para sa pag-diagnose ng pagkakaroon ng HPV ay batay sa pangunahing katangian ng PCR upang ihiwalay ang viral DNA mula sa materyal. Dahil sa mataas na sensitivity ng pagsubok, kahit na maliit na halaga ng bakterya ay makikita. Ang dami ng pananaliksik ay nagbibigay sa mga doktor ng pagkakataong matukoy ang antas ng panganib ng sakit at gumawa ng pagtataya para sa hinaharap. Ang diagnosis na ito ay sapilitan para sa lahat ng kalalakihan at kababaihan na nakadiskubre ng mga condylomas. Ang quantitative PCR analysis ay makakatulong na matukoy kung ano ang sanhi ng pag-unlad ng HPV: isang pansamantalang pagbaba sa kaligtasan sa sakit o isang malalang sakit.

Para sa herpes

Ang ganitong uri ng mga diagnostic sa microbiology ay nakakatulong na magsagawa ng PCR analysis para sa herpes na may mataas na katumpakan. Ang pagkopya ng mga fragment ng DNA ng virus ay magaganap lamang kung ang nais na gene ay naroroon sa materyal. Sa kasong ito, ang mga resulta ng pagsubok ay maaaring magpahiwatig ng presensya o kawalan ng pathogen. Maaari itong matukoy kahit na sa mababang konsentrasyon sa dugo.

Ang isa pang bentahe ng PCR test ay maaari itong makakita ng herpes viral infection kaagad pagkatapos ng impeksyon, bago lumitaw ang mga klinikal na sintomas. Maaari mong matukoy ang uri ng herpes (1 o 2);

• pinirito;
• talamak;
• alak;
• mataba.

Sa panahon ng pagbubuntis

Kapag nagdadala ng isang bata, napakahalaga na isagawa ang pananaliksik na ito upang mairehistro ang kondisyon ng babae. Ang pagsusuri ng PCR sa panahon ng pagbubuntis ay kasama sa listahan ng pinaka mabisang pamamaraan pagtukoy sa pagkakaroon ng iba't ibang sakit. Ang pagsubok ay kinakailangan hindi lamang upang makilala ang mga pathology, kundi pati na rin upang matukoy ang posibilidad ng impeksiyon ng bata sa utero. Salamat lamang sa mga diagnostic ng PCR naging posible upang matukoy ang antas ng pag-unlad, ang pag-unlad ng maraming mga impeksiyon sa loob ng sinapupunan.

Pagkuha ng mga pagsusuri sa PCR

Kung nagtataka ka kung paano kinukuha ang pagsusuri ng PCR, dapat isaalang-alang ang bawat indibidwal na kaso, na isinasaalang-alang ang uri ng biomaterial. Ang isang scraping, smear o blood draw ay may sariling katangian, halimbawa.

Ang polymerase chain reaction (PCR) ay isang high-precision molecular genetic diagnostic method na nagbibigay-daan sa iyo upang matukoy ang iba't ibang mga nakakahawang at namamana na sakit sa mga tao, kapwa sa talamak at talamak na yugto, at bago pa man mahayag ang sakit.

Ang polymerase chain reaction (PCR) ay binuo ni Kary Mullis (USA) noong 1983, kung saan siya ay ginawaran ng Nobel Prize sa Chemistry noong 1993.

Ang pagsusuri sa PCR ay naging isang uri ng “gold standard” para sa karamihan ng mga impeksyon. Karamihan sa mga espesyalista ay nakakaranas nito halos araw-araw at hindi maiisip na gumawa ng pangwakas na diagnosis nang wala ito. Ang PCR ay kadalasang nagiging tanging reaksyon upang matukoy ang mga aktibong yugto ng sakit sa mga pagkakataong hindi gumagana ang ibang bacteriological, virological, at immunological diagnostic na pamamaraan.

Mga kalamangan ng PCR diagnostics sa modernong gamot:

Direktang pagtuklas ng presensya ng isang pathogen (ibig sabihin, isang partikular na rehiyon ng DNA o RNA ng pathogen) sa sample ng pagsubok.
Ang mataas na pagtitiyak ay nagbibigay-daan sa iyo upang matukoy ang isang natatanging seksyon ng DNA o RNA na katangian ng isang tiyak na pathogen, na nag-aalis ng posibilidad ng mga maling reaksyon.
Ang mataas na sensitivity ng paraan ng PCR ay nagbibigay-daan sa iyo upang makita ang kahit na mga solong selula ng mga pathogens (mga virus, bakterya). Ang sensitivity ng PCR analysis ay 10-1000 cells sa test sample (halimbawa, ang sensitivity ng immunological at microscopic tests ay 103-105 cells lang).
Pag-unlad ng isang unibersal na pamamaraan ng PCR para sa pagtuklas ng iba't ibang mga pathogen. Ang object para sa pananaliksik gamit ang PCR method ay ang genetic material (DNA, RNA) ng pathogen. Ang pamamaraan ay nagpapahintulot sa iyo na makilala ang ilang mga pathogens mula sa isang biological sample.
Makatanggap ng mga resulta ng pagsusuri nang medyo mabilis. Ang isang buong pagsusuri ay isinasagawa sa loob ng 4-4.5 na oras, mas madalas - mas matagal.
Ang kakayahang makita ang mga pathogens bago ang simula ng mga sintomas ng sakit (preclinical diagnosis) at pagkatapos na lumipas ang sakit (retrospective diagnosis). Ang isang halimbawa ng preclinical diagnostics ay ang pagsusuri sa panahon ng incubation period (mula sa sandali ng impeksyon hanggang sa magreklamo ang pasyente), pati na rin ang nakatagong impeksiyon (kapag walang mga sintomas, ngunit ang data lamang ng laboratoryo - PCR, halimbawa). Isa sa mahahalagang puntos Ang PCR diagnostics ay ang pagsasagawa ng PCR sa archival material o biological remains, na mahalaga para sa pagkakakilanlan ng personalidad o paternity.

Sa kasalukuyan, ang mga diagnostic ng PCR ay sumasailalim sa makabuluhang pag-unlad. Ang pamamaraan mismo ay pinapabuti, ang mga bagong uri ng PCR ay lilitaw nang paulit-ulit, at ang mga bagong sistema ng pagsubok para sa reaksyong ito ay pumapasok sa medikal na merkado. Dahil dito, nagiging mas abot-kaya ang halaga ng PCR studies para sa malawak na hanay ng mga pasyente bawat taon.

Ano ang batayan ng pamamaraan ng PCR?

Ang batayan ng polymerase chain reaction ay ang paulit-ulit na pagdodoble (amplification) ng isang partikular na seksyon ng DNA o RNA gamit ang mga enzyme sa laboratoryo. Bilang resulta, nabuo ang dami ng DNA o RNA na sapat para sa visual analysis. Sa panahon ng pag-aaral, tanging ang lugar na umaangkop sa mga tinukoy na kondisyon ang kinokopya, at kung ito ay nasa sample ng pagsubok.

Halimbawa, ang materyal para sa pananaliksik kung saan ang pagkakaroon ng mga fragment ng DNA o RNA ng isang pathogen (laway, dugo, ihi, paglabas mula sa mga genital organ) ay ipinapalagay na naroroon ay inilalagay sa isang espesyal na reaktor (amplifier). Susunod, ang mga tiyak na enzyme ay idinagdag dito, na nagbubuklod sa DNA o RNA ng pathogen, at ang kopya nito ay synthesize. Ang pagkopya na ito ay nangyayari sa ilang yugto tulad ng isang "chain reaction", at sa huli ay daan-daan at libu-libong kopya ang maaaring mabuo mula sa isang kopya ng genetic na materyal. Pagkatapos ay darating ang pagsusuri at paghahambing ng resulta sa umiiral na database sa istraktura ng iba't ibang mga pathogen. Gamit ang PCR, hindi mo lamang matukoy ang uri ng pathogen, ngunit nagbibigay din ng isang dami ng resulta ng pagsusuri, iyon ay, kung gaano karaming mga pathogen ang nasa katawan ng tao.

Ang paraan ng PCR ay kasalukuyang nagpapalawak ng hanay ng mga posibilidad ng pananaliksik: pagpapakilala ng mga mutasyon, pag-splice ng mga fragment ng DNA, at naging laganap sa medisina, halimbawa, upang maitaguyod ang pagiging ama, ang paglitaw ng mga bagong gene, atbp.

Anong mga impeksyon ang maaaring matukoy gamit ang mga diagnostic ng PCR?

1) Impeksyon sa HIV (maaaring matukoy ang human immunodeficiency virus HIV-1)
2) Viral hepatitis A, B, C, G (RNA-HAV, DNA-HBV, RNA-HCV, RNA-HGV)
3) Nakakahawang mononucleosis (Epstein-Barr virus DNA - EBV)
4) Cytomegalovirus infection (DNA-CMV)
5) Herpes infection (DNA herpes simplex virus HSV type 1 at 2)
6) Mga STI (mga impeksiyon na nakukuha sa pakikipagtalik) – ureaplasmosis, gardnerellosis, chlamydia, mycoplasmosis, trichomoniasis,
7) Tuberculosis (Mycobacterium tuberculosis)
8) Mga oncogenic na virus - impeksyon sa papillomavirus (human papillomavirus (kabilang ang mga oncogenic na uri nito 16, 18, 31, 33, 45, 51, 52, 56, 58, at 59)
9) Borreliosis, tick-borne encephalitis
10) Listeriosis
11) Candidiasis (fungi ng genus Candida)
12) Impeksyon ng Helicobacter pylori
at iba pa

Isinasaalang-alang ang hanay ng mga pathogen, ang mga diagnostic ng PCR ay aktibong ginagamit sa ginekologiko, urological practice, nakakahawang sakit na kasanayan, pulmonology, phthisiology, gastroenterology, hematology, oncology at iba pa.

Materyal para sa pananaliksik at mga patakaran para sa pagkolekta nito

Ang materyal para sa pananaliksik sa PCR, kung saan maaaring matukoy ang dayuhang bacterial DNA o viral DNA o RNA, ay maaaring iba't ibang biological media at likido ng tao: mucus, ihi, dugo, plema, scrapings ng epithelial cells, placental tissue, dugo, prostate juice, amniotic fluid, pleural fluid.

Kapag nagsusuri para sa mga impeksiyon na nakukuha sa pakikipagtalik ( sexually transmitted infections (STIs), ang mga lalaki at babae ay sinusuri para sa mga pagtatago ng ari, isang pahid o pag-scrape mula sa cervix, isang pahid o pag-scrape mula sa urethra (urethra), at ihi.

Kapag sinusuri ang mga impeksyon (mga impeksyon sa herpetic, CMV, mononucleosis, toxoplasmosis, hepatitis B, C, impeksyon sa HIV), ang dugo ay kinuha para sa PCR.

Upang masuri ang nakakahawang mononucleosis, CMV, o herpetic infection, kinukuha ang pamunas mula sa lalamunan, at kinukuha ang ihi upang suriin para sa CMV. Kadalasan, ang cerebrospinal fluid ay kinukuha sa panahon ng isang serye ng mga pag-aaral upang suriin kung may pinsala sa nervous system.

Sa pulmonology, ang materyal na ginamit ay plema at pleural fluid.

Kapag sinusuri ang mga impeksyon sa intrauterine - amniotic fluid, placental tissue.

Paghahanda para sa paghahatid ng materyal at PCR diagnostics

Halos lahat ng mga pasyente na sumasailalim sa mga diagnostic ng PCR ay may karapatang umasa sa isang maaasahan, tumpak at mabilis na resulta, na higit sa lahat ay nakasalalay sa mga kakayahan ng laboratoryo at ang propesyonalismo ng doktor sa laboratoryo. Kasabay nito, marami ang hindi nag-iisip na ang pagiging maaasahan na ito ay higit na nakasalalay sa ating sarili, lalo na sa mga rekomendasyon ng nagpapagamot na doktor, pamumuhay at ang kawastuhan ng koleksyon ng materyal. Kapag nangongolekta ng materyal, kinakailangan ang mga kundisyon na hindi kasama ang kontaminasyon (kontaminasyon) ng materyal at, nang naaayon, nagdududa sa objectivity ng pagsusuri.

Ang wastong paghahanda para sa pagsusumite ng materyal ay hindi partikular na mahirap. Mayroong mga sumusunod na rekomendasyon mula sa mga doktor para sa mga pasyente:

1) hindi maging aktibo sa pakikipagtalik isang araw bago isumite ang materyal;
2) ang dugo para sa pagsusuri ay ibinibigay sa umaga nang walang laman ang tiyan (huwag kumain o uminom);
3) kapag nag-donate ng ihi, ang unang bahagi ng umaga ay kinokolekta sa isang malinis at sterile na lalagyan.

Oras ng kahandaan para sa pagsusuri ng PCR

Ang huling resulta ay handa na 1.5-2 araw pagkatapos isumite ang materyal. Sa ilang mga kaso, ang resulta ay handa na sa unang araw.

Interpretasyon ng mga resulta ng PCR

Negatibo ang resulta ng PCR ay nagpapahiwatig na walang mga bakas ng mga nakakahawang ahente ang natagpuan sa materyal na pagsubok sa oras ng paghahatid. Karamihan sa mga kaso ay nagpapakita ng kawalan ng impeksiyon na sinubukang matagpuan sa sample ng pagsubok.

Positibo ang resulta ng PCR ay nagpapahiwatig ng pagtuklas ng mga bakas ng impeksyon sa biological sample na sinusuri. Sa mahusay na katumpakan, ang isang positibong resulta ay nagpapahiwatig ng pagkakaroon ng impeksyon sa isang naibigay na oras.

Mayroong mga sitwasyon kung saan ang PCR ay lumalabas na positibo, ngunit ang isang tao ay hindi maaaring magsalita tungkol sa isang aktibong impeksiyon - ito ang tinatawag na "malusog na carrier" na walang mga klinikal na sintomas ng sakit, na hindi nangangailangan ng paggamot, ngunit nangangailangan ng dynamic na pagsubaybay ng isang doktor. . Ito ay mas madalas na sinusunod sa isang bilang ng mga impeksyon sa virus (HPV, impeksyon sa CMV, impeksyon sa EBV, impeksyon sa herpetic at iba pa) sa mga materyales tulad ng laway, mga scrapings ng cervical canal, urethra, iyon ay, mula sa isang lokal na pokus. Gayunpaman, hindi natin dapat kalimutan ang paghahatid ng impeksyon mula sa mga carrier malusog na tao ay posible, tulad ng paglipat sa isang talamak na anyo ng sakit na may pag-activate ng proseso. Kung positibo ang PCR sa dugo, hindi na ito isang karwahe at nangangailangan ng partikular na paggamot.

Ang dami ng resulta ng PCR ay tinasa lamang ng isang doktor nang paisa-isa para sa isang partikular na impeksyon nang hiwalay at walang mga pangkalahatang gradasyon. Batay sa dami ng resulta ng PCR, matutukoy ng doktor ang antas ng aktibidad ng impeksyon at itakda ang yugto ng sakit, na tiyak na makakaapekto sa kurso at dosis ng mga iniresetang gamot.

Isa sa mga huling kapana-panabik na tanong: gaano katumpak ang mga diagnostic ng PCR?

Mayroong 3 kahulugan para sa pagsusuri ng PCR:

1. Katumpakan (na may mataas na antas ng posibilidad na matukoy o maiwasan ang impeksyon).
2. Pagtitiyak (katumpakan ng pagtuklas ng isang partikular na impeksiyon).
3. Sensitivity (kahit na may mababang nilalaman ng genetic na materyal ng mga pathogen sa sample ng pagsubok, ang impeksyon ay makikita).

Ang polymerase chain reaction ay halos hindi gumagawa maling positibong resulta(iyon ay, walang mga positibong sample kung saan walang impeksyon). Ang mga maling negatibong resulta ay bihira (madalas dahil sa kawalan ng aktibong impeksiyon sa tao sa ngayon). Halimbawa, nakatagong impeksiyon, talamak na impeksiyon na walang aktibidad.

Ang nakakahawang sakit na doktor N.I Bykova

Video tungkol sa kung bakit at paano kumuha ng PCR test para sa mga impeksyon

Ang PCR (polymerase chain reaction) ay isang tagumpay ng molecular biology, isa sa mga pangunahing pamamaraan ng clinical laboratory diagnostics ng huling bahagi ng ika-20 at unang bahagi ng ika-21 siglo, na nagdadala ng napakalaking benepisyo sa iba't ibang larangan ng medikal na agham.

Kaya, kahit na sa milyun-milyong mga selula ng katawan ng tao ay hindi ang buhay na virus mismo ang nawala, ngunit isang butil lamang ng DNA nito, kung gayon ang PCR, kung walang makagambala dito, ay malamang na makayanan ang gawain at iulat ang presensya ng isang "stranger" na may positibong resulta. Ito ang kakanyahan ng PCR at ang pangunahing bentahe nito.

Mga kalamangan at kahinaan

Ang laboratoryo na nagsasagawa ng PCR diagnostics ay napapailalim sa pinakamataas na kinakailangan sa mga tuntunin ng kagamitan, mga sistema ng pagsubok at mga kwalipikasyon ng mga medikal na tauhan. Ito ay isang high-tech na laboratoryo na may arsenal ng napakasensitibo at napakaspesipikong reagents, kaya wala itong anumang partikular na disadvantages. Maliban kung nagbibigay ito ng positibong resulta sa kawalan mga klinikal na pagpapakita at sa gayon ay inilalagay ang clinician sa isang dilemma: dapat ba siyang magsimula ng paggamot o hindi?

Ang doktor na nagmamasid sa pasyente ay nagsisimulang mag-alinlangan sa pagiging maaasahan ng mga resulta ng pagsusulit, dahil wala siyang nakikitang anumang mga palatandaan ng sakit. Ngunit gayon pa man, dahil sa mataas na sensitivity ng PCR system, dapat itong alalahanin na nakikita nito ang pathogen kahit na sa preclinical stage, at ang isang positibong resulta sa kasong ito ay higit na isang kalamangan kaysa sa isang kawalan. Batay dito, ang dumadating na manggagamot ay dapat magpasya sa kanyang sarili sa pagpapayo ng therapy, na isinasaalang-alang ang iba pang mga argumento "para sa" at "laban".

Ang mga pakinabang ng mga diagnostic gamit ang polymerase chain reaction ay halata:

• Mataas na pagtitiyak, na umaabot sa 100%, dahil sa pagkakaroon sa napiling sample ng mga particle ng nucleic acid na likas sa isang partikular na organismo, ngunit dayuhan sa mga tao;
• Mataas na pagganap, dahil ang PCR ay isang high-tech na automated technique na nagbibigay ng pagkakataon na magsagawa ng pagsubok sa araw ng sampling at sa gayon ay mapawi ang pasyente mula sa mga hindi kinakailangang alalahanin;
• Ang PCR, na nagtatrabaho sa isang sample, ay may kakayahang magsagawa ng ilang pag-aaral at tuklasin ang maraming mga pathogen, kung mayroon siyang ganoong gawain. Halimbawa, kapag nag-diagnose ng impeksyon sa chlamydial, kung saan ang PCR ay isa sa mga pangunahing pamamaraan, kasama ang chlamydia, maaari ring makita ng isa ang Neisseria (gonococcus), ang causative agent. Bukod dito, hindi ito negatibong nakakaapekto sa pagiging maaasahan ng mga resulta;
• Pagsusuri sa PCR ay mapanganib na mga mikroorganismo sa panahon ng pagpapapisa ng itlog, kapag wala pa silang oras upang magdulot ng malaking pinsala sa katawan, iyon ay, ang maagang pagsusuri ay nagbabala sa paparating na pag-unlad ng proseso ng pathological, na ginagawang posible na maghanda para dito at dalhin ito nang lubusan.

Bilang karagdagan, upang maiwasan ang mga hindi pagkakaunawaan na kung minsan ay lumitaw sa panahon ng diagnosis, pinoprotektahan din ng PCR ang sarili sa pamamagitan ng katotohanan na ang mga resulta nito ay maaaring maitala (larawan, computer) para sa layunin ng paggamit ng mga ito para sa mga layunin ng eksperto, kung kinakailangan.

Ang pamantayan sa mga tugon ng PCR ay isinasaalang-alang negatibong resulta , na nagpapahiwatig ng kawalan ng mga fragment ng mga dayuhang nucleic acid, ang isang positibong sagot ay magpahiwatig ng pagkakaroon ng impeksyon sa katawan, ang mga digital na halaga ay nagpapahiwatig ng estado ng virus at ang konsentrasyon nito sa oras ng pagsubok. Gayunpaman, ang isang kumpletong interpretasyon ng pagsusuri ay isinasagawa ng isang doktor na sumailalim sa espesyal na pagsasanay sa paksang "PCR". Walang saysay na subukang bigyang-kahulugan ang mga resulta sa iyong sarili, dahil maaari mong, tulad ng malamang na mangyari, hindi maunawaan at magsimulang mag-alala nang maaga.

Ano ang "kinatatakutan" ng PCR, ano ang magagawa nito at paano ito paghahandaan?

Tulad ng iba pang pananaliksik, minsan ang mga resulta ng pagsusulit ay maling positibo o maling negatibo, kung saan ang PCR ay walang pagbubukod. Ito ay maaaring mangyari sa mga sumusunod na kaso:

1. Mga paglabag sa teknolohikal na proseso sa isa sa mga yugto ng reaksyon;
2. Pagkabigong sumunod sa mga patakaran para sa pagkolekta ng materyal, pag-iimbak o pagdadala nito;
3. Ang pagkakaroon ng mga dayuhang impurities sa materyal.

Iminumungkahi nito na ang mga diagnostic ng PCR ng mga impeksyon ay dapat na lapitan nang maingat, maingat at tumpak, kung hindi, ang mga sample ng materyal ay maaaring magbago ng kanilang istrukturang istruktura o ganap na bumagsak.

Mga yugto ng PCR diagnostics. Ang mga maling resulta ay maaaring sanhi ng mga paglabag sa anumang yugto ng pag-aaral.

Ang mga diagnostic ng PCR ng mga impeksyon ay kabilang sa kategorya ng "mga pamantayang ginto" sa iba pang mga pamamaraan ng laboratoryo, kaya maaari itong magamit upang maghanap ng mga pathogen ng maraming sakit na, sa unang sulyap, ay walang pagkakatulad sa bawat isa:

• Tuberculosis ng iba't ibang lokalisasyon, pneumonia (kabilang ang hindi tipikal, sanhi ng chlamydia);
• Mga impeksyon sa pagkabata (tigdas rubella, beke, tigdas);
• Dipterya;
• Salmonellosis;
• Zoonotic infectious disease - listeriosis (ang sakit ay nailalarawan sa pamamagitan ng iba't ibang mga sintomas na may pinsala sa mga lymph node, central nervous system, at mga panloob na organo);
• Mga sakit na dulot ng Epstein-Barr virus (nakakahawang mononucleosis, atbp.);
• Oncological pathology na dulot ng impeksyon ng human papillomavirus (HPV at mga uri nito);
• Borreliosis (Lyme disease, tick-borne encephalitis);
• Impeksiyon ng Helicobacter pylori, ang causative agent kung saan ay ang microbe na Helicobacter pylori na naninirahan sa tiyan ng tao. Napatunayan na ang Helicobacter ay nagiging sanhi ng pag-unlad ng kanser sa tiyan o duodenal;
• at halos lahat.

Ang pagsusuri sa PCR ng mga impeksiyon na nakukuha sa pakikipagtalik ay partikular na kahalagahan, dahil madalas ang mga sakit na dulot ng ganitong paraan matagal na panahon mangyari nang walang anumang mga klinikal na pagpapakita, ngunit sa panahon ng pagbubuntis nagsisimula silang maging mas aktibo at, sa gayon, nagbabanta sa kalusugan at maging sa buhay ng bata. Pareho sila ng ugali. Ang ilan sa mga ito ("tango") ay tumutukoy din sa mga STI, kaya ang huli ay nangangailangan ng mas detalyadong pagsasaalang-alang. Magagawa ng mambabasa na maging pamilyar sa mga pinakasikat na pamamaraan sa mga sumusunod na seksyon ng artikulo.

Paano maayos na maghanda upang makakuha ng maaasahang mga resulta?

Tandaan natin kaagad na ang paghahanda para sa PCR ay medyo simple at hindi nangangailangan ng anumang espesyal na pagsisikap sa bahagi ng pasyente. Kailangan mo lamang kumpletuhin ang tatlong simpleng gawain:

1. Huwag makipagtalik 24 oras bago kumuha ng pagsusulit;
2. Upang kumuha at subukan ang dugo mula sa isang ugat, kailangan mong dumating sa isang walang laman na tiyan, sa pamamagitan ng paraan, hindi ka rin maaaring uminom;
3. Ang ihi ay dapat ibigay sa gabi (sa umaga - sa isang sterile na garapon na binili noong araw bago sa parmasya).

Maaaring gumana ang PCR sa anumang biological na kapaligiran

Ang paraan ng PCR ay hindi "uhaw sa dugo" at samakatuwid ay tumatanggap ng anumang biyolohikal na medium na naglalaman ng isang pinaghihinalaang nakakahawang ahente ang pagpili ng kung ano ang dadalhin para sa pananaliksik ay nananatili sa doktor.

Kaya, sa paghahanap ng isang pathogen, bilang karagdagan sa isang pagsusuri sa dugo (bagaman ito ay angkop din at sa karamihan ng mga kaso ay kinuha kahanay sa iba pang materyal), maaari mong gamitin ang:

• (paglabas mula sa urogenital tract);
• Pag-scrape ng mauhog lamad ng oral cavity, conjunctiva, nasopharynx, genital tract (para sa mga kababaihan, kinuha mula sa cervix at puki, para sa mga lalaki - mula sa urethra);
• laway;
• tamud;
• Katas ng prostate;
• Placental tissue at amniotic fluid (amniotic fluid);
• Ang sediment ng ihi (pagkatapos ng centrifugation), halimbawa, para makita ang ilang mga STI at Mycobacterium tuberculosis;
• Ang plema at pleural fluid para sa parehong layunin;
• Exudate;
• Ang cerebrospinal fluid kung pinaghihinalaang impeksyon sa central nervous system;
• Biopsy material (bioptat) na kinuha mula sa atay, duodenum, tiyan, atbp.

Sa itaas, nais kong idagdag na sa lahat ng mga kaso, magkakaroon ng sapat na materyal para sa pagsubok, kahit na sa mga scrapings at secretions, dahil ang pagsubok ng PCR ay hindi nangangailangan ng malalaking volume para sa pagsusuri, na kadalasang kinukuha sa isang Eppendorf microtube at ipinadala para sa pag-aaral.

Mga sakit at paggamit ng PCR

HIV at polymerase chain reaction

Karaniwan, kapag sumasailalim sa isang hindi kilalang pagsusuri, sa kaso ng mga positibong resulta ng immunoblotting, ang diagnosis ay inuulit muli. Kung ang diagnosis ay nakumpirma, ang pasyente ay inireseta ng mga karagdagang pagsusuri:

1. Ang pagpapasiya, gamit ang mga immunological na reaksyon, ng mga ganap na halaga ng bilang ng CD 4 lymphocytes (immunocompetent cells - T-helpers o helpers), kung saan ang impeksyon ay unang nakakaapekto, pagkatapos nito nawala ang kanilang mga pangunahing katangian at hindi makilala sa pagitan ng "sarili" at "banyaga." Napagkamalan nila ang viral RNA na nagpapalipat-lipat sa plasma ng dugo para sa mga normal na selula ng katawan at hindi tumutugon sa kanila;
2. Ang pagtuklas ng viral RNA sa pamamagitan ng PCR at pagkalkula ng konsentrasyon ng mga particle ng viral upang maitaguyod ang yugto, kalubhaan ng proseso ng pathological at pagbabala batay sa mga datos na ito. Siyempre, ang salitang "karaniwan" ay hindi umiiral sa bagay na ito, dahil ang reaksyon ay palaging positibo, at ang pag-decipher ng mga digital na halaga ay nasa loob ng kakayahan ng doktor.

PCR at hepatitis

Ang paraan ng PCR ay maaaring makakita ng mga pathogens kadalasan ang pagsusuri ay ginagamit upang masuri ang hepatitis C, na mahirap tuklasin ng ibang mga pamamaraan.

Ang hepatitis C virus (na naglalaman ng RNA) ay kahawig ng HIV sa pag-uugali nito sa katawan ng tao. Nakatali sa genome ng mga selula ng atay (hepatocytes), nananatili itong naghihintay sa mga pakpak, na maaaring dumating sa hindi bababa sa 2 taon, kahit na sa loob ng 20 taon, kaya naman binansagan ito ng mga doktor na "ang banayad na mamamatay." Ang Hepatitis C ay humahantong sa pagbuo ng isang malignant na proseso sa parenkayma ng atay, na nagpapakita ng sarili sa mga huling yugto. Hindi napapansin ng immune system ang lahat ng mga pangyayaring ito, napagkakamalang isang hepatocyte ang virus. Totoo, ang mga antibodies sa virus ay ginawa sa ilang dami, ngunit hindi sila nagbibigay ng isang disenteng tugon sa immune. Para sa pag-diagnose ng hepatitis C, ang ELISA ay hindi masyadong nagbibigay-kaalaman, dahil ito ay nagpapahiwatig na ang virus ay nag-iwan ng mga bakas, ngunit kung ito ay nawala nang kusa ay hindi alam. Sa HCV, ang mga kaso ng pagpapagaling sa sarili ay nalalaman, habang ang mga antibodies laban sa virus ay nananatili at patuloy na umiikot habang buhay (immunological memory). Ang PCR ay kapansin-pansing nauuna sa pagbuo ng mga antibodies at maaaring makakita ng isang viral particle sa loob ng 1-1.5 na linggo, habang ang mga antibodies ay maaaring lumitaw sa pagitan mula 2 buwan hanggang anim na buwan

Ang mga diagnostic ng PCR sa kaso ng pinaghihinalaang laganap na hepatitis C virus sa katawan ng tao ay ang pinakamainam na paraan ng pananaliksik, dahil ito lamang ang nakakakilala sa pagkakaroon ng isang "magiliw na kaaway" sa biopsy ng dugo o atay ng pasyente.

Gayunpaman, kung minsan may mga kaso kapag ang mga antibodies ay positibo, ngunit ang resulta ng PCR ay negatibo. Minsan ito ay nangyayari kapag ang dami ng virus ay napakababa o kapag ito ay nasa "dormant" na estado sa atay nang hindi pumapasok sa daluyan ng dugo. Upang mahanap pa rin ang katotohanan, ang pasyente ay binibigyan ng pangalawang pagsubok, o higit pa sa isa.

Impeksyon ng human papillomavirus

Kung hindi magaganap ang pagpapagaling sa sarili, maaari rin itong, nang hindi nagpapakita ng sarili sa anumang paraan, ay magpatuloy nang mahabang panahon sa katawan ng may-ari, na hindi man lang pinaghihinalaan, dahil hindi ginawa ang PCR, at walang mga sintomas ng ang sakit. Gayunpaman, ang pagkakaroon ng impeksyon sa papillomavirus, kahit na nakatago, ay malayo sa walang malasakit sa kalusugan ng tao, kung saan ang ilang uri ng virus na nagdudulot ng kanser (mga uri 16, 18) ay nagdudulot ng isang partikular na panganib.

Mas madalas, ang kalahating babae ng populasyon ay naghihirap mula sa HPV, dahil ang virus ay mas pinipili ang babaeng genital area, at lalo na ang cervix, kung saan ang ilang mga uri ng mga virus ay nag-aambag sa pagbuo ng mga dysplastic na proseso, at pagkatapos ay ang cervical cancer, kung ang dysplasia ay hindi ginagamot. at ang virus ay binibigyan ng libreng pagpigil. Kaya, ang polymerase chain reaction ay makakakita ng viral DNA, at pagkatapos ay ipahiwatig ang "masama" o "mabuti" (oncogenic o non-oncogenic) na uri ay nanirahan sa katawan ng babae.

Iba pang mga impeksyon sa STI at TORCH

Malinaw, ang polymerase chain reaction ay makakahanap ng anumang dayuhang istraktura na binubuo ng mga nucleic acid, kaya ang pagsusulit na ito ay angkop para sa pagtukoy ng lahat ng mga STD at TORCH na impeksyon, gayunpaman, hindi ito palaging ginagamit. Bakit, sabihin nating, magsagawa ng gayong mamahaling pag-aaral upang matukoy ang gonococcus, kung mayroong mas madaling ma-access at mas mura?

Ang mga impeksyon sa TORCH at mga STI ay magkakaugnay na kung minsan ay mahirap matukoy kung aling grupo ang isang partikular na pathogen ay dapat na uriin. Sa pangkalahatan, maaaring mahirap unawain ang mga ito, dahil ang mga ito ay medyo magkakaibang grupo ng mga mikroorganismo na maaaring maipadala sa pakikipagtalik palagi o sa ilalim lamang ng ilang partikular na kondisyon (immunodeficiency), at maaaring maging interesado lamang sa panahon ng pagbubuntis, dahil sa posibleng negatibong epekto sa takbo nito at sa fetus.

Ang PCR ay ang pangunahing paraan para makita ang mga nakatagong impeksyon

Ang pagbuo ng mga klinikal na pagpapakita ay batay sa iba't ibang mga pathogen, na maaari lamang makita ng PCR, na siyang pangunahing gawain nito, kung minsan kasama ng ELISA, at kung minsan. bilang ang tanging confirmatory test, lalo na kung walang sintomas ng sakit. Ang ganitong mahirap na sitwasyon ay maaaring malikha ng isang impeksiyong polymicrobial, na, bilang karagdagan sa mga halatang pathogen, ay kinabibilangan din ng mga oportunistikong pathogen.

Ang Ureaplasma ay madalas na isinasaalang-alang kasabay ng mycoplasma. At ito ay hindi walang dahilan. Ang mga species na ito, tulad ng chlamydia, ay hindi mga virus o bakterya; Kaya, upang makilala ang isang malusog na carrier mula sa isang taong may sakit, kinakailangan ang mga espesyal na pamamaraan, kung saan ang PCR ay itinuturing na pinaka maaasahan, dahil, dahil sa mga tampok na istruktura at pag-uugali ng mga microorganism na ito, ang iba pang mga pag-aaral ay hindi epektibo.

Tulad ng para sa (uri 1, 2) at, na kabilang din sa mga herpes virus (uri 5), ang sitwasyon dito ay hindi maliwanag din. Ang rate ng impeksyon ng populasyon sa mundo ay papalapit sa 100%, kaya sa kasong ito ang pagkilala sa virus at ang dosis nito ay napakahalaga, na lalo na gumaganap ng isang papel sa panahon ng pagbubuntis, dahil para sa isang may sapat na gulang, isang virus na nag-ugat sa kanyang katawan madalas ay hindi nagiging sanhi ng anumang problema at hindi nagbibigay ng mga palatandaan ng sakit.

Samakatuwid, hindi dapat balewalain ng isang tao ang naturang pagsusuri na inireseta ng isang doktor, dahil sa ilang mga kaso, ang reaksyon ng kadena ng polymerase ay isang sapilitan at kinakailangang paraan ng mga diagnostic ng laboratoryo na maaaring maprotektahan hindi lamang ang isang babae, kundi pati na rin ang isang maliit, hindi pa isinisilang na tao mula sa malubhang komplikasyon.

Sa konklusyon, nais kong tandaan na ang napakagandang pamamaraan tulad ng PCR ay naglilingkod sa sangkatauhan nang higit sa 30 taon. Kasabay nito, ang mga layunin ng pagsubok ay hindi limitado sa paghahanap ng mga pathogen ng mga nakakahawang sakit. Ang polymerase chain reaction, na isinilang batay sa molecular biology, ay inextricably na nauugnay sa genetics, ito matagumpay na ginamit sa forensics para sa personal na pagkakakilanlan, sa forensic medicine para magtatag ng paternity, sa beterinaryo na gamot, kung ang klinika ng hayop ay may pagkakataon na bumili ng mamahaling kagamitan, gayundin sa ibang mga lugar (industriya, Agrikultura atbp.).

Video: PCR - kakanyahan at aplikasyon